Variaties in geneesmiddelgevoeligheid tussen tweedimensionale en driedimensionale traditiemethoden bij triple-negatieve borstkanker bij de meeste kankercellen
Driedimensionale (3D) traditie toont de complexiteit van de tumorbiologie in tegenstelling tot tweedimensionale (2D) traditie. Aldus heeft 3D-traditie aandacht gekregen in celbiologisch onderzoek samen met onderzoeken naar geneesmiddelgevoeligheid.
Hierin hebben we variaties in antikankermedicijngevoeligheden tussen 2D- en 3D-traditiemethoden in triple-negatieve borstkanker (TNBC) celstammen onderzocht. 13 TNBC-celstammen werden drie dagen eerder in stand gehouden in 2D- en 3D-culturen dan de publiciteit voor geneesmiddelen. Celmorfologie binnen de 3D-traditie werd onderzocht met fasecontrastmicroscopie.
Gevoeligheden voor epirubicine (EPI), cisplatine (CDDP) en docetaxel (DTX) zijn onderzocht door middel van cellevensvatbaarheidstest in elke culturen en in tegenstelling daarmee. De IC50’s van alle drie de medicatie zijn aanzienlijk groter geweest binnen de 3D-traditie dan binnen de 2D-traditie in de meeste celstammen.
Deze zijn gecorreleerd tussen de 2D- en 3D-culturen in EPI (R = 0,555) en CDDP (R = 0,955), maar niet in DTX (R = 0,221). Sferische sferoïde-vormende cellen zijn extra bestendig tegen makelaars dan druivensoorten. Concluderend, de 3D-traditie was extra bewijs tegen alle drie de medicatie dan de 2D-traditie in de meeste TNBC-celstammen. Gevoeligheid voor CDDP was extreem gecorreleerd tussen de 2D- en 3D-culturen, maar niet voor DTX. 2D-traditie zou ook acceptabel kunnen zijn voor gevoeligheid, kijk eens naar voor DNA-beschadigende makelaars.
Ontwikkeling van een extracellulaire matrix-mannequin voor 3D-geest om het samenspel tussen microglia en T-cellen in co-traditie te beoordelen
Neurodegeneratieve problemen worden gekenmerkt door de activering van in de hersenen aanwezige microgliacellen en door de infiltratie van perifere T-cellen. Desalniettemin is hun interactie bij ziekte niet opgehelderd, maar. Het is moeilijk om gecompliceerde mobiele dynamiek bij levende dieren te onderzoeken, en eenvoudige tweedimensionale (2D) celtraditie-modes lijken niet op de delicate 3D-constructie van hersenweefsel. Vervolgens hebben we een biomimetisch 3D in vitro traditiesysteem ontwikkeld voor het samen kweken van microglia- en T-cellen.
Omdat activering en / of migratie van immuuncellen in de geest mogelijk wordt beïnvloed door delen van de extracellulaire matrix, zijn geschetste 3D-fibrillaire op collageen I gebaseerde matrices geconstrueerd en gemodificeerd met hyaluronan en / of chondroïtinesulfaat, die lijken op de punten van de geest. extracellulaire matrix.
Muizenmicroglia en milt-afgeleide T-cellen zijn alleen of in co-cultuur op de geconstrueerde matrices gekweekt.
Microglia vertoonde een in vivo-achtige morfologie en T-cellen bevestigden verbeterde overleving wanneer ze samen met microglia werden gekweekt of tot een klein diploma in de aanwezigheid van glia-geconditioneerd medium.De open en poreuze fibrillaire constructie van de matrix maakte celinvasie en directe cel-cel interactie mogelijk, met een sterkere invasie van T-cellen. Elke celsortering bevestigde geen afhankelijkheid van de matrixmodificaties. Microglia kan op de matrices worden geactiveerd door lipopolysaccharide, wat leidt tot secretie van interleukine-6 en tumornecrosefactor-α. De bevindingen hierin wijzen erop dat biomimetische 3D-matrices co-cultivatie en activering van belangrijke microglia- en T-cellen mogelijk maken en nuttige instrumenten leveren om hun interactie in vitro te beoordelen.
Een tweedimensionale multiwell celcultuurmethode voor de productie van CYP3A4 tot expressie brengende hepatocyte-achtige cellen uit HepaRG-cellen
Cytochroom P450-enzymen (CYP) werken bij het metabolisme van geneesmiddelen in de lever. Om een flink aantal kandidaat-geneesmiddelen te bepalen, is een high-content screening (HCS) -systeem met hepatocyt-achtige cellen (HLC’s) nodig die volwassen menselijke hepatocyten kunnen veranderen. Humaan hepatocellulair carcinoom HepaRG is de enige cellijn die HLC’s kan aanbieden met overmatige CYP3A4-expressie, vergelijkbaar met die in volwassen hepatocyten na celdifferentiatie.
Het doel van dit onderzoek was om een geweldig multiwell-traditiesysteem te ontwerpen voor HLC’s met behulp van transgene HepaRG-cellen die het EGFP tot expressie brengen dat codeert voor een verbeterd onervaren fluorescerend eiwit onder CYP3A4-transcriptieregulatie. HLC’s zijn gerijpt op 5 verschillende soorten 96-wells zwarte platen.
Het kweken van HLC’s op optische CVG-platen met glazen bodem bevorderde de celrijping en verhoogde metabolische inspanning aanzienlijk door tweevoudig onder tweedimensionale (2D) traditiesituaties, en deze opties zijn verbeterd door een coating van 2% collageen.
Drie platen voor driedimensionale (3D) celculturen met een gasuitwisselbare doek of dimethylpolysiloxaanmembraan aan de achterkant vormden een aantal bolvormige kolonies, terwijl ze ineff
Proces van PCR
De PCR bestaat uit een proces dat bestaat uit een reeks van temperatuurwisselingen die 25-50 keer wordt herhaald. Er zijn drie fasen van de cyclus, de eerste fase maakt de scheiding van de dubbele nucleïnezuurketen mogelijk bij ongeveer 95 * C, en de tweede fase maakt de binding van de primers mogelijk met behulp van een DNA-sjabloon bij een temperatuur van ongeveer 50 * -60 * C en de derde fase vergemakkelijkte de polymerisatie die wordt uitgevoerd door het DNA-polymerase bij een temperatuur tussen 68-72 ° C.
Er is de kleine omvang van de fragmenten, dus de laatste stap is het type PCR dat hun aantal kan verhogen tijdens de uitlijningsfase en de denaturatiestap en de vier stappen worden gemeten tijdens korte temperatuurfasen die slechts een paar seconden duren met de temperatuur rond 80 * C om de aanwezigheid van primerdimeren te verminderen.
Niet-specifieke detectie – real-time PCR met dubbelstrengs DNA
Een DNA-bindende kleurstof is een kleurstof die bij PCR aan alle dubbelstrengs DNA bindt, en de opbrengst van de kleurstof verhoogt ook het fluorescentiekwantum. de toename van de DNA-productie tijdens de PCR-tijd leidt tot een toename van de intensiteit van de fluorescentie die bij elke cyclus wordt gemeten. Er zijn echter enkele kleurstoffen zoals SYBR Green die alle dsDNA PCR-producten bindt die ook niet-specifieke PCR-producten bevatten.
De reactie van real-time PCR is al zoals gewoonlijk voorbereid, met toevoeging van fluorescerend dsDNA. Real-time PCR-instrument meet de intensiteit van fluorescentie met een detector, de kleurstof fluoresceert alleen wanneer deze is gebonden aan het dsDNA. Deze methode heeft het perfecte voordeel dat er slechts een paar primers nodig zijn die de amplificatie uitvoeren, wat ook de kosten laag houdt en er zijn meerdere doelen die in een buis kunnen worden bewaakt door verschillende soorten kleurstoffen te gebruiken.
