Metabolomische benaderingen om chemische blootstellingsgerelateerde metabolismeveranderingen in zoogdiercelculturen te bestuderen
Organische organismen worden continu blootgelegd tot een immens repertoire van moleculen die moleculen en medicijnen uit de omgeving of van voedsel omhullen, waardoor een gestage beweging van stimuli-afhankelijke diversificaties ontstaat.
• De verscheidenheid van die chemische stoffen naast hun concentraties dragen bij aan de veelheid aan geïnduceerde resultaten, samen met activering, stimulatie of remming van fysiologische processen en toxiciteit. Metabolisme, omdat het belangrijkste fenotype en manifestatie van het leven is, heeft bevestigd dat het enorm delicaat is en zich extreem aanpast aan chemische stimuli.
• Vervolgens levert het leren van de impact van endo- of xenobiotica op mobiel metabolisme onschatbare informatie op om mogelijke mobiele oefeningen van bepaalde persoonsmoleculen te begrijpen en hun acute of machtsvoordelen en toxiciteit te overwegen.
• De gebeurtenis van hedendaagse toegepaste metabolomica-wetenschappen, verwant aan massaspectrometrie of nucleaire magnetische resonantiespectroscopie, biedt nu ongekende mogelijkheden voor de snelle en milieuvriendelijke wilskracht van metabole profielen van cellen en extra gecompliceerde organische methoden. Gemengd met het aanbod van gevestigde celtraditie-strategieën, lijken deze analytische strategieën volledig geschikt om de organische oefening te achterhalen en de constructieve en ongunstige resultaten van chemische stoffen in heel veel celsoorten en modes te schatten, zelfs bij nauwelijks detecteerbare concentraties.
• Metabole fenotypes zullen worden geschat door intracellulaire metabolieten te leren bij homeostase in vivo, terwijl in vitro celculturen extra toegang bieden tot metabolieten die worden uitgewisseld met progressieve media.
• Deze tekst bespreekt analytische opties die er zijn voor metabole fenotypering van het metabolisme van de celtraditie, naast de algehele metabolomics-workflow die geschikt is voor het testen van de organische oefening van moleculaire verbindingen.
• We benadrukken hoe metabole profilering van celsupernatanten en intracellulaire extracten onschatbare en complementaire inzichten kan opleveren voor het evalueren van de gevolgen van xenobiotica op het mobiele metabolisme. We zeggen dat de ideeën en strategieën die in de eerste plaats voor xenobiotica-publiciteit worden genoemd, in grote mate relevant zijn voor het testen van geneesmiddelen in het algemeen, samen met endobiotica die energetische metabolieten, vitamines, peptiden en eiwitten, cytokines, hormonen, voedingsvitamines, enzovoort omvatten.
Description: FluoroQuestâ„¢ Antifade Mounting Medium is a specialized and stable formula that effectively preserves fluorescence by preventing rapid photobleaching of fluorescent proteins and dyes.
Description: FluoroQuestâ„¢ Antifade Mounting Medium is a specialized and stable formula that effectively preserves fluorescence by preventing rapid photobleaching of fluorescent proteins and dyes.
Description: FluoroQuestâ„¢ PLUS Antifade Mounting Medium, the latest breakthrough in non-setting media technology, provides unparalleled protection against fading throughout the visible spectrum, including far-red wavelengths.
Description: FluoroQuestâ„¢ PLUS Antifade Mounting Medium, the latest breakthrough in non-setting media technology, provides unparalleled protection against fading throughout the visible spectrum, including far-red wavelengths.
Description: SuperKine™ Enhanced Antifade Mounting Medium is compatible with a wide range of fluorescent dyes and protects the entire visible and infrared spectrum from fluorescence signal quenching.
Description: SuperKine™ Enhanced Antifade Mounting Medium is compatible with a wide range of fluorescent dyes and protects the entire visible and infrared spectrum from fluorescence signal quenching.
Description: SuperKine™ Enhanced Antifade Mounting Medium with DAPI is compatible with a wide range of fluorescent dyes and protects the entire visible and infrared spectrum from fluorescence signal quenching.
SuperKine™ Enhanced Antifade Mounting Medium with DAPI
Description: SuperKine™ Enhanced Antifade Mounting Medium with DAPI is compatible with a wide range of fluorescent dyes and protects the entire visible and infrared spectrum from fluorescence signal quenching.
SuperKine™ Enhanced Antifade Mounting Medium with DAPI
Een langdurige belangrijke traditie van zoogdiercellen is te allen tijde moeilijk te wijten aan de onvermijdelijke veroudering. Standaardstrategieën voor het produceren van onsterfelijk gemaakte celstammen vereisen normaal gesproken manipulatie van het genoom, wat uiteindelijk leidt tot verandering van essentiële organische en genetische eigenschappen. Niet zo lang geleden kwam voorwaardelijke herprogrammering (CR) naar voren als een nieuw volgend technologisch instrument voor de lange termijn traditie van belangrijke epitheelcellen afkomstig van bijna alle oorsprong zonder verandering van de genetische achtergrond van belangrijke cellen.
CR kweekt belangrijke cellen samen met geïnactiveerde 3T3-J2-fibroblasten van muizen in de aanwezigheid van RHO-gerelateerde proteïnekinase (ROCK) -remmer Y-27632, waardoor belangrijke cellen stamachtige eigenschappen kunnen accumuleren terwijl ze hun potentieel behouden om volledig te differentiëren.
Met slechts enkele jaren groei vertoont CR brede vooruitzichten voor doeleinden in verschillende gebieden, samen met ziektemodellering, regeneratieve medicijnen, medicijnanalyse, medicijnontdekking naast precisiemedicijnen. Deze evaluatie is dus bedoeld om de huidige vooruitgang in het begrijpen van het mechanisme van CR en zijn brede doelen volledig samen te vatten en te beoordelen, waarbij de waarde van CR in elk primair en translationeel onderzoek wordt benadrukt en de uitdagingen waarmee CR wordt geconfronteerd, worden besproken.
Resultaten van Kifunensine op productie en N-glycosylering Modificatie van butyrylcholinesterase in een transgene rijstcelcultuurbioreactor
De productie en N-glycosylering van recombinant humaan butyrylcholinesterase (BChE), een mannequin met extreem geglycosyleerd therapeutisch eiwit, in een transgene rijstcelsuspensie-traditie behandeld met kifunensine, een krachtige α-mannosidase I-remmer, werd bestudeerd in een bioreactor van 5 liter.
Op dag 7 van de teelt werd een mediahandel uitgevoerd door het uitroeien van verbruikt suikerrijk medium (NB + S) en het opnemen van recent suikervrij (NB-S) medium om de rijst-α-amylase 3D (RAmy3D) -promotor ertoe te brengen rijst te leveren recombinant humaan BChE (rrBChE). Het gebruik van een 1,25x-geconcentreerd suikervrij medium samen met een 80% verlaagde werkhoeveelheid via de mediahandel leidde tot een volledig energetische rrBChE-productiegraad van 79 ± 2 µg (g FW) -1 of 7,5 ± 0. 4 mg L- 1 binnen de p
Achtergrond.
Een tot expressie gebracht gen in een cel is een cel waarin het aantal cellen kan worden gemeten aan de hand van het aantal RNA-transcripten van dat gen dat in een monster aanwezig is. Om gen in een kleine hoeveelheid RNA te detecteren en te kwalificeren, is amplificatie van gentranscriptie noodzakelijk. Het is een veelgebruikte methode voor het amplificeren van DNA en RNA-monsters worden eerst omgekeerd getranscribeerd naar complementair DNA (cDNA) met reverse transcriptase.
om kleine hoeveelheden DNA te detecteren, is de methodologie die wordt gebruikt voor conventionele PCR met behulp van een DNA-template volledig dezelfde, een geschikte bufferoplossing, ten minste één paar specifieke primers, deoxyribonucleotiden en een thermostabiele DNA-polymerase.
Het maakt het ook mogelijk om de generatiesnelheid van het geamplificeerde product bij elke PCR-CYCLUS te meten. De gegevens analyseren die door de computersoftware worden gegenereerd om de relatieve genexpressie te berekenen. Om de aanwezigheid van een bepaalde DNA-sequentie te bepalen, wordt kwantitatieve PCR toegepast. Een real-time methode is een meting die wordt uitgevoerd na elke amplificatiecyclus.
De moderne methoden voor het bestuderen van genexpressie zijn kwantitatieve PCR en DNA-microarray. enkele oudere methoden die worden gebruikt om de abundantie van mRNA te meten I.en Rnase-beschermingstest, differentiële test en Northern blot. Northern blotting is blotting die wordt gebruikt om de overvloed van zijn mRNA-transcript in een monster te visualiseren. Bij deze methode wordt met behulp van agarosegelelektroforese RNA gescheiden en overgebracht naar een vaste matrix.
Deze techniek wordt nog steeds gebruikt om genexpressie te beoordelen die een grote hoeveelheid RNA nodig heeft en geeft ook kwalitatieve of semi-kwantitatieve informatie over mRNA-niveaus. Het is ontwikkeld voor het kwantificeren van de totale genexpressie, en het is meestal gericht op het kwantificeren van het specifieke gen waarover wordt bestudeerd naar een ander gen dat ook bekend staat als het normaliserende gen. Deze genen worden ook geselecteerd uit huishoudgenen omdat hun functie ook verband houdt met basale cellulaire overleving, wat normaal gesproken constitutieve genexpressie impliceert.
