Histon (HIS) Polyklonaler Antikörper (Pan-Spezies)

Die Erzeugung von polyklonalen Antikörpern oder PAb ist schwierig und zeitaufwändig, da ein Antigen erforderlich ist, um eine Reaktion des Immunsystems hervorzurufen, die stark genug ist, um IgG zu binden. In diesem Artikel wird untersucht, wie Antikörper gegen Histon H2A im Kaninchenmodell erzeugt werden. Die Erzeugung von polyklonalen Antikörpern oder PAb ist ein langwieriger und schwieriger Prozess. Kurz gesagt, es muss ein Antigen erzeugt werden, das eine Reaktion des Immunsystems hervorruft, die stark genug ist, um IgG zu binden. Die Haupttypen von Antigenen zur Erzeugung von Antikörpern sind lösliche Proteine, unlöslichProteine ​​und Peptide.1 Dieser Artikel konzentriert sich auf die Erzeugung polyklonaler Antikörper unter Verwendung von Histon H2A als Antigen. Histon H2A ist die epigenetische Markierung, die die repressiven Wirkungen von Polycomb-Komplexen vermittelt, indem sie trimethyliertes Lysin-27-Histon (H3K27me3) rekrutiert.2 Histon H2A wird vielen posttranslationalen Modifikationen unterzogen, um die Genexpression zu regulieren. Diese

Was sind polyklonale Antikörper?

Polyklonale Antikörper sind eine Art von Antikörpern, die von mehreren B-Zellen produziert werden. Diese Antikörper haben ein breites Spektrum an Spezifität , was bedeutet, dass sie viele verschiedene Antigene erkennen und daran binden können. Dies macht sie nützlich für die Behandlung einer Vielzahl von Krankheiten.

Polyklonale Antikörper werden hergestellt, indem einem Tier ein Antigen injiziert wird. Das Immunsystem des Tieres produziert dann Antikörper gegen das Antigen. Diese Antikörper werden vom Tier gesammelt und zur Behandlung von Krankheiten verwendet.

Polyklonale Antikörper haben mehrere Vorteile gegenüber anderen Arten von Antikörpern. Sie können in großen Mengen hergestellt werden und weisen ein breites Spektrum an Spezifitäten auf. Dies macht sie nützlich für die Behandlung einer Vielzahl von Krankheiten.

Terminologie erklärt:

Der Begriff „polyklonale Antikörper“ bezieht sich auf eine Gruppe von Antikörpern, die aus mehreren unterschiedlichen Quellen stammen. In diesem Fall sind die polyklonalen Antikörper gegen die HA-Histon-Untereinheit.

Histone sind eine Gruppe von Proteinen, die eine wichtige Rolle bei der DNA-Replikation und -Reparatur spielen. Die HA-Histonuntereinheit ist eine der vier Haupttypen von Histonen. Es ist an der Regulation der Genexpression beteiligt.

Polyklonale Antikörper werden hergestellt, indem einem Tier ein Protein oder ein anderes Molekül injiziert wird, das das Antigen enthält (in diesem Fall die HA-Histon-Untereinheit). Das Immunsystem des Tieres produziert Antikörper gegen das Antigen. Diese Antikörper werden dann aus dem Blut des Tieres gereinigt und für Forschungs- oder andere Zwecke verwendet.

Polyklonale Antikörper haben gegenüber monoklonalen Antikörpern mehrere Vorteile. Sie können mehrere Epitope erkennen (der Teil eines Antigens, der von einem Antikörper erkannt wird), sie sind normalerweise stabiler und können in großen Mengen produziert werden.

Definition von Polyklonalität

Polyklonalität ist die Produktion einer Population von Antikörpern mit unterschiedlichen Antigenbindungsstellen. Dies führt zu einem vielfältigeren Spektrum an Antikörpern, die an eine größere Vielfalt von Antigenen binden können. Polyklonale Antikörper werden hergestellt, indem einem Tier ein Antigen injiziert wird. Das Immunsystem des Tieres produziert als Reaktion auf das Antigen eine Vielzahl unterschiedlicher Antikörper. Diese Antikörper werden dann aus dem Tier isoliert und für Forschungs- oder Therapiezwecke verwendet.

Polyklonale Antikörper haben gegenüber monoklonalen Antikörpern mehrere Vorteile. Es ist wahrscheinlicher, dass sie an ein breiteres Spektrum von Antigenen binden, einschließlich solcher, die dem ursprünglichen Antigen strukturell ähnlich sind . Es ist auch weniger wahrscheinlich, dass sie beim Menschen eine Immunantwort hervorrufen, wenn sie zu therapeutischen Zwecken verwendet werden. Polyklonale Antikörper sind jedoch schwieriger in großen Mengen herzustellen als monoklonale Antikörper.

Arten von Antikörpern (monoklonal und polyklonal)

Es gibt zwei Haupttypen von Antikörpern: monoklonale und polyklonale. Monoklonale Antikörper werden aus einem einzigen Typ von Immunzellen hergestellt und erkennen und binden an ein einziges spezifisches Ziel . Polyklonale Antikörper hingegen werden aus mehreren Arten von Immunzellen hergestellt und können an mehrere Ziele binden.

Polyklonale Antikörper sind im Allgemeinen wirksamer als monoklonale Antikörper, da sie an mehrere Ziele binden können. Dadurch binden sie beispielsweise eher an ein mutiertes Virus oder Bakterium. Polyklonale Antikörper verursachen auch weniger Nebenwirkungen, da sie weniger spezifisch sind.

Polyklonale Antikörper können gegen jedes Protein erzeugt werden, einschließlich der HA-Histon-Untereinheit. Um polyklonale Antikörper zu erzeugen, werden immunisierte Tiere (normalerweise Kaninchen) verwendet. Die immunisierten Tiere produzieren große Mengen an Antikörpern, die dann gereinigt und in der Forschung oder Therapeutik verwendet werden.

Insgesamt haben polyklonale Antikörper viele Vorteile gegenüber monoklonalen Antikörpern. Sie sind wirksamer und verursachen weniger Nebenwirkungen. Sie können auch gegen jedes Protein erzeugt werden, was sie sehr vielseitig macht.

Vorteile und Nachteile

1. Vorteile:

Polyklonale Antikörper haben eine Reihe von Vorteilen gegenüber monoklonalen Antikörpern. Sie sind einfacher und kostengünstiger herzustellen und können mehrere Epitope auf einem Zielprotein erkennen. Dies macht sie wirksamer gegen Proteine, die Veränderungen, wie z. B. Mutationen, unterzogen wurden. Darüber hinaus können polyklonale Antikörper verwendet werden, um auf mehrere Proteine ​​gleichzeitig abzuzielen.

2. Nachteile:

Polyklonale Antikörper haben auch einige Nachteile. Ihre Produktion ist weniger effizient als die von monoklonalen Antikörpern und sie sind weniger spezifisch. Dies bedeutet, dass sie mit anderen Proteinen kreuzreagieren können, was in Experimenten zu falsch positiven Ergebnissen führen kann. Außerdem sind polyklonale Antikörper weniger stabil als monoklonale Antikörper und können mit der Zeit abgebaut werden. 3. Reinigung: Polyklonale Antikörper werden aus dem Blut eines Tieres gereinigt. Es gibt zwei Verfahren zur Reinigung von Antikörpern aus dem Blut, nämlich das Protein-A- und das Protein-G-Verfahren. Das Protein-A-Verfahren beinhaltet das Immunisieren von Tieren mit dem interessierenden Zielantigen und das anschließende Sammeln ihres Serums. Dem Tier wird dann ein Protein injiziert, das mit einem adsorbierenden Material namens Agarose (einer Zuckerart) verbunden ist. Als nächstes binden die fremden Antigene auf den Zellen des Tieres an das Adsorptionsmaterial (Protein A), während die Anti-Target-Antigen-Antikörper in seinem Serum an das Antigen binden. Der Rest dieses Materials wird weggespült, sodass nur die Antikörper zurückbleiben, die an ihr Zielantigen gebunden haben.

Fazit

Zusammenfassend haben wir ein Verfahren zur Erzeugung von polyklonalen Antikörpern gegen die HA-Histon-Untereinheit etabliert. Dies wird für zukünftige Studien nützlich sein, die die Rolle dieses Proteins in zellulären Prozessen untersuchen. Wir arbeiten derzeit auch an der Generierung monoklonaler Antikörper gegen HA, die für spezifischere Anwendungen wie die Immunhistochemie nützlich sein werden.

 Danksagungen Wir möchten den histologischen Diensten der Universität Liverpool, insbesondere Ms. Kelly Croston, für ihre Unterstützung bei der Gewinnung von Gewebe aus menschlichem erwachsenem Gehirn und fötalem Gehirn danken. Wir danken auch Dr. Ian Kellan für seine Hilfe bei der Durchführung der ELISAs. Abschließend möchten wir unseren Kollegen der Developmental Therapeutics Unit an der University of Liverpool für ihre anhaltende Unterstützung danken.