Collectieve celmigratie van fibroblasten wordt beïnvloed door horizontale trillinge

Collectieve celmigratie van fibroblasten wordt beïnvloed door horizontale trillinge

Collectieve celmigratie van fibroblasten wordt beïnvloed door horizontale trillingen van de celcultuurschaal

Het reguleren van de collectieve migratie van cellen is een cruciale moeilijkheid bij bio-engineering. Het verbeteren of onderdrukken van celmigratie en het beheersen van het migratieverloop is gunstig voor talrijke fysiologische verschijnselen die verwant zijn aan wondtherapie.

• Er is melding gemaakt van een aantal strategieën voor migratieregulatie die voornamelijk gebaseerd zijn op totaal verschillende mechanische stimuli. Terwijl trillingsstimuli, vergelijkbaar met geluidsgolven, veelbelovend zijn voor het reguleren van migratie, is de impact van het trillingsverloop op collectieve celmigratie niet diepgaand bestudeerd.

• Vervolgens hebben we een trilsysteem gemaakt dat horizontale trillingen kan toepassen op een celtraditie-schotel. Hier hebben we de impact geëvalueerd van het trillingsverloop op de collectieve migratie van fibroblasten in een wond-etalagepop die bestaat uit twee traditionele gebieden gescheiden door een nis.

• De resultaten bevestigden dat het trillingsverloop de celmigratieafstand beïnvloedt: trillingen orthogonaal op het gat vergroten de collectieve celmigratieafstand, terwijl trillingen parallel aan het gat dit onderdrukken. De resultaten bevestigden bovendien dat situaties die resulteren in een grotere migratieafstand, ook verband houden met een verhoogd glucoseverbruik. Bovendien veranderen de celkernen onder situaties waarin celmigratie wordt verkocht in langwerpig en georiënteerd orthogonaal op het gat. Ter onderscheiding: onder situaties die de migratieafstand verkleinen, zijn celkernen georiënteerd op de baan parallel aan het gat.

Een nieuw driestappenprotocol om extracellulaire blaasjes te isoleren uit plasma of celcultuurmedium met elke overmatige opbrengst en zuiverheid

Extracellulaire blaasjes (EV) zijn membraan-ingekapselde nanodeeltjes die kunnen werken in intercellulaire communicatie, en hun aanwezigheid in biovloeistoffen zal indicatief zijn voor (patho) fysiologische situaties. Onderzoek gericht op het oplossen van functionaliteiten van EV of het vinden van EV-geassocieerde biomarkers voor ziekte in vloeibare biopsieën wordt belemmerd door de beperkingen van de huidige protocollen om EV te isoleren uit biovloeistoffen of celtraditie-medium.

EV-isolatie wordt verfijnd door de> 105-voudige numerieke extra van verschillende vormen van deeltjes, samen met lipoproteïnen en eiwitcomplexen. Naast hardnekkige verontreinigingen, kunnen de huidige EV-isolatiestrategieën te lijden hebben van inefficiënte EV-restauratie, vooringenomenheid voor EV-subtypen, interferentie met de integriteit van EV-membranen en gebrek aan EV-prestaties.

Op basis van dit onderzoek hebben we een nieuwe, niet-selectieve techniek in drie stappen ontwikkeld om EV te isoleren uit bloed- of celtraditie-media met elke overmatige opbrengst en zuiverheid, wat leidt tot 71% herstel en bijna volledige eliminatie van niet-gerelateerde (lipo) eiwitten. Dit EV-isolatieproces is onafhankelijk van slecht gedefinieerde zakelijke kits en vereist, afgezien van een ultracentrifuge, geen gespecialiseerde dure uitrusting.

skinsandbones
skinsandbones

Vloeistofchromatografische profilering van monosaccharideconcentraties in gecompliceerde celkweekmedia en fermentatiebouillons

Een stabiele sectie-extractie, vloeistofchromatografie en fluorescentie (SPE-RPLC-FL) primair gebaseerd protocol voor de wilskracht van vrije monosacchariden in extreem gecompliceerde ongekookte materialen, poeders en geformuleerde fermentatie-grondstoffen en -bouillon is ontwikkeld.

• Monosacchariden in patroondextracten zijn voor de kolom gederivatiseerd met anthranilzuur en de derivaten zijn gescheiden met behulp van reversed-phase LC met fluorescentiedetectie. Gebruikmakend van een 2,1 mm × 50 mm 1. 8 µm Zorbax Eclipse XDB-C18 kolom, een bewegingslading van 0,4 ml min-1 en een acetonitrilgradiënt in een natriumacetaatbuffer (pH 4,3; 50 mmol L-1) de basislijn beslissing van glucosamine, mannosamine, galactosamine,

• galactose, mannose, glucose, ribose, xylose, fucose en siaalzuur werden binnen 20 minuten bereikt. Derivatisering vóór de kolom betrof het combineren van een 30 mg mL-1 resolutie van anthranilzuur in een verhouding van 1: 1 met een waterig alledaags voorafgaand aan injectie.

• Gebruikelijke analytische efficiëntienormen zijn gebruikt voor analysefuncties, waarbij de strategie werd ontdekt om LOD’s te vertonen van slechts 10 fmol, lineair en exact te zijn (% RSD <2,2% (n = 7). De tactiek werd gebruikt voor de evaluatie van een verscheidenheid aan uiterst gecompliceerde biofarmaceutische productiemonsters, samen met gistolaatpoeders, chemisch geschetste media en in-process fermentatiebouillonmonsters. Betrokken patroonvoorbereiding door een waterig patroon te passeren via een C18 stabiele sectie-extractiepatroon om hydrofobe peptiden en nutritionele vitamines te lokken, met herstel van kijken allemaal naar suikers van meer dan 90%.

• Ten slotte werd een alledaagse statistische evaluatie uitgevoerd op monsters van totaal verschillende tonnen met als doel de variabiliteit van partij tot partij in te schatten.

Toepassing.

Er zijn veel toepassingen voor een kwantitatieve polymerasekettingreactie in het laboratorium, omdat deze kan worden gebruikt voor diagnostisch en fundamenteel onderzoek. Toepassingen van de techniek in de industrie zijn onder meer

• Kwantificering van genexpressie.
Het is een uitdrukking door traditionele DNA-detectiemethoden die onbetrouwbaar zijn. Detectie van mRNA op een Northern-blot of PCR-producten op een gel of Southern-blot maakt nauwkeurige kwantificering niet mogelijk. Real-time PCR kan worden gebruikt om zeer gebruikelijke twee methoden te kwantificeren.

1) Relatieve kwantificering
2) Absolute kwantificering
Relatieve kwantificering is gebaseerd op interne referentiegenen om vouwverschillen in expressie van het doelgen te bepalen.
Absolute kwantificering geeft hetzelfde aantal doelwit-DNA-moleculen in vergelijking met DNA-standaarden met behulp van een kalibratiecurve.

• Diagnostische toepassingen.
Diagnostisch kwalitatief wordt gebruikt om snel nucleïnezuur te detecteren dat diagnostisch is voor infectieziekten, kanker en genetische afwijkingen. Het laboratorium voor klinische microbiologie heeft de diagnose van infectieziekten aanzienlijk verbeterd.

• Microbiologische toepassingen.
Kwantitatieve PCR wordt gebruikt door microbiologen die werkzaam zijn op het gebied van voedselveiligheid, fermentatie, voedselbederf en microbiële risicobeoordeling van waterkwaliteit en bescherming van de volksgezondheid.

• Detectie van fytopathogenen.
De landbouwsector streeft er voortdurend naar om een ​​plant te produceren die vrij is van ziekteverwekkers om economische verliezen te voorkomen en de gezondheid te vrijwaren.

Detectie van genetisch gemodificeerde organismen.
qPCR gebruikt reverse transcriptie om GGO’s te detecteren, gezien het dynamische gevoeligheidsbereik in het detectiebereik. Zoals DNA- of eiwitanalyse zijn meestal minder gevoelig. Het wordt uitgevoerd door relatieve kwantificering met behulp van een controlegen van de behandelde soort dat slechts als een enkele kopie aanwezig is.

• Klinische kwantificering en genotypering.
Er is een virus dat bij mensen aanwezig kan zijn als gevolg van directe infectie of co-infectie, waardoor de diagnose moeilijk is met behulp van verschillende klassieke technieken die kunnen resulteren in een onjuiste prognose en behandeling.

 

Leave a Reply

Your email address will not be published. Required fields are marked *