Abstrakt
Porphyromonas gingivalis wurde mit der Entwicklung und Progression von Plattenepithelkarzinomen des Ösophagus (ESCC) in Verbindung gebracht und gilt als Hochrisikofaktor für ESCC. Derzeit sind die üblicherweise verwendeten Methoden zum Nachweis von P. gingivalis kultur- oder DNA-extraktionsbasiert, die entweder zeit- und arbeitsintensiv sind, insbesondere für Anwendungen mit hohem Durchsatz. Unser Ziel war es, ein schnelles und empfindliches direktes quantitatives Polymerase-Kettenreaktionsprotokoll (qPCR) zum Nachweis von P.
gingivalis ohne DNA-Extraktion zu etablieren und zu evaluieren, das für groß angelegte epidemiologische Studien geeignet ist. Paarweise Zahnfleischabstrichproben von 192 Probanden, die sich einer allgemeinen medizinischen Untersuchung unterzogen, wurden mit zwei direkten und einem extraktionsbasierten qPCR-Assay auf P. gingivalis analysiert. Tris-EDTA-Puffer-basierte direkte qPCR (TE-direkte qPCR), Lyse-basierte direkte qPCR (Lyse-direkte qPCR) und DNA-Extraktions-basierte qPCR (Kit-qPCR) wurden jeweils in 192, 132 und 60 dieser Fälle verwendet Proben zur Quantifizierung von P. gingivalis. Die Sensitivität und Spezifität der TE-direkten qPCR betrug 95,24 % bzw. 100 % im Vergleich zur Lyse-direkten qPCR, die 100 % bzw. 97,30 % im Vergleich zur Kit-qPCR betrug; TE-direkte qPCR wies eine nahezu perfekte Übereinstimmung mit Lyse-direkter qPCR (κ = 0,954) und Kit-qPCR (κ = 0,965) auf. Darüber hinaus betrug die für die TE-direkte qPCR verwendete Testzeit 1,5 h. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass der TE-direkte qPCR-Assay eine einfache und effiziente Methode zur Quantifizierung von oralem P. gingivalis ist und im Vergleich zur routinemäßigen qPCR eine hohe Sensitivität und Spezifität aufweist.
Porphyromonas gingivalis, ein häufiger Erreger der menschlichen Parodontitis, gilt als Prädiktor für Krankheitsverlauf und -aktivität [1]. Kürzlich wurde in mehreren Veröffentlichungen berichtet, dass P.
gingivalis mit mehreren Krebsarten beim Menschen in Verbindung gebracht wird [2, 3], einschließlich Mund-, Speiseröhren- und Bauchspeicheldrüsenkrebs, sowie einigen Erkrankungen im Zusammenhang mit extraoralen Infektionen [4]. In China stellt das Plattenepithelkarzinom des Ösophagus (ESCC) einen der wichtigsten histologischen Subtypen dar, der für etwa die Hälfte der jährlich weltweit diagnostizierten Neuerkrankungen verantwortlich ist. Zuvor fanden wir heraus, dass die erhebliche Belastung von P.
- gingivalis im ESCC mit Differenzierung, Lymphknotenmetastasen und schlechter Prognose korrelierte [2] und die Häufigkeit des Organismus im ESCC signifikant höher war, verglichen mit niedrigen oder nicht nachweisbaren Spiegeln in der Kardia und distal Magenkrebs [5]. Zusammengenommen legen diese Ergebnisse nahe, dass P. gingivalis ein Hochrisikofaktor für ESCC sein könnte, insbesondere in Gebieten mit hoher Endemie in China. Die Prävalenz von P.
- gingivalis in solchen Populationen muss jedoch noch charakterisiert werden, weshalb ein einfaches, schnelles und genaues Verfahren für seinen Nachweis erforderlich ist. Gegenwärtig bleiben Molekular- und Kulturtechniken die wichtigsten Werkzeuge für den Nachweis von P.
- gingivalis in parodontalen Proben. Obwohl hochspezifisch, benötigt die Kulturmethode etwa 5–7 Tage bis zur Positivität, hat aber eine geringe Spezifität [6] und ist für molekularepidemiologische Studien schlecht geeignet.
- PCR-basierte Techniken, insbesondere quantitative (qPCR), werden häufig verwendet, um P. gingivalis-DNA in Speichel, Zahnbelag und anderen Proben zu quantifizieren [7]. Die meisten dieser Assays erfordern DNA-Extraktions- oder Freisetzungsprozesse, die nicht nur zeitaufwändig sind, sondern auch zum Verlust von Template-DNA führen [8].
- Direkte PCR-Amplifikationsassays werden seit mehreren Jahren für eine Reihe von Anwendungen eingesetzt und bieten mehrere Vorteile, da sie schnell, wirtschaftlich und effizient sind und Laborvariationen und Probenkontamination minimieren. Die in Mundabstrichen verwendeten Konservierungsmittel stellen jedoch einige Herausforderungen für den PCR-Nachweis dar, da sie bekannte PCR-Inhibitoren wie hohe Konzentrationen an Salz und EDTA sowie Detergenzien enthalten können [9].
- Wir wollten die Anwendbarkeit einer auf Tris-EDTA (TE)-Puffer basierenden direkten qPCR zum Nachweis von P. gingivalis-DNA in oralen Abstrichproben für groß angelegte epidemiologische Studien entwickeln und bewerten und diesen Assay mit lysebasierter direkter qPCR und DNA vergleichen Extraktionsbasierte qPCR.
Paarweise Mundabstriche wurden von 192 Probanden entnommen, die sich im September 2019 einer medizinischen Untersuchung am First Affiliated Hospital der Henan University of Science and Technology unterzogen.
Die Ausschlusskriterien der Probanden waren wie folgt: morgens geputzte Zähne; parodontale oder orale Behandlung im letzten Jahr; Antibiotika oder entzündungshemmende Arzneimitteltherapie in den letzten 3 Monaten; jede verwandte systemische Erkrankung (z. B. Diabetes); schwanger; und Probanden mit weniger als 20 Zähnen. Das Studiendesign wurde von der Ethikkommission des First Affiliated Hospital der Henan University of Science and Technology genehmigt, und alle Teilnehmer gaben ihre Einwilligung nach Aufklärung. Zu den demografischen Daten der Probanden gehörten Alter, Geschlecht, Raucherstatus (definiert als niemals, ehemaliges und aktuelles Rauchen) und Alkoholkonsum.
Die Proben wurden morgens gesammelt, indem die Wangeninnenseite für 30 s mit einem iCleanhcy Flocking Swab (Shenzhen HuaChenYang Technology Co., Ltd, Shenzhen, China) gemäß den Anweisungen des Herstellers abgewischt wurde. Der Tupferkopf wurde abgeschnitten und in das Röhrchen mit 1 ml Konservierungslösung in der Originalverpackung gegeben; diese wurden bei 4 °C gelagert und innerhalb einer Woche nach der Probenahme getestet.
Das Sammelrohr wurde für 30 s gevortext. Nach kurzem Zentrifugieren (3500–5000 × g für 1 min) wurde der Überstand in ein 1,5-ml-Mikrozentrifugenröhrchen überführt und 10 min bei 12 000 × g zentrifugiert; der Überstand wurde verworfen.
Ein Satz der 192 Proben wurde wie folgt behandelt: 50 &mgr;l Tris-EDTA (10 mm Tris, 1 mm EDTA, pH 8,0) wurden zugegeben, gründlich gevortext, um das Pellet zu resuspendieren, das bis zur Verwendung bei Raumtemperatur gehalten wurde. Ein zweiter Satz von 132 der 192 Probanden wurde der folgenden Behandlung unterzogen: 50 μl Lysepuffer (#18LS11001, Yaneng BioSciences, Shenzhen, China) wurden zu jedem Tupfer gegeben, gründlich gevortext, mikrozentrifugiert und das Pellet wurde wie oben resuspendiert. Nach 10-minütigem Erhitzen auf 100 °C wurde der Extrakt 10 min lang bei 12 000 × g zentrifugiert und der Überstand bis zur Verwendung bei Raumtemperatur gelagert. Für die verbleibenden 60 Proben wurde DNA unter Verwendung des MicroElute Genomic DNA Kit (#D3096-02, Omega Bio-tek, Inc. Norcross, Georgia, USA) extrahiert und in 30 μl vorgewärmtem Elutionspuffer eluiert.
Die Sensitivität des direkten qPCR-Assays wurde an einer simulierten positiven Probe einer 1-ml-Suspension von P. gingivalis ATCC33277 mit 1 × 109 Kopien/ml bestimmt; dieses wurde zu dem vorbereiteten Pellet eines Zahnfleischabstrichs hinzugefügt, der von einem P. gingivalis-negativen Teilnehmer genommen wurde.
Nach 10-minütigem Zentrifugieren bei 12.000 × g wurde das Pellet in 100 μl TE-Puffer resuspendiert, der dann seriell in 10-fachen Schritten verdünnt wurde, um Konzentrationen von 107 bis 10 Kopien/ml zu ergeben. Der Zyklusschwellenwert (Ct) wurde verwendet, um die Zellzahl pro Probe abzuschätzen.
Die in dieser Studie verwendeten Primer- und Sondensequenzen waren wie zuvor beschrieben und wurden von Genewiz Company, Suzhou, China, synthetisiert. Um ein geeignetes DNA-Amplifikationssystem für die TE-direkte qPCR zu bestimmen, wurden 11 P. gingivalis-positive Abstrichproben in den Hintergrund von zwei DNA-Polymerasesystemen, nämlich AceQ qPCR Probe Master Mix (#Q112-03, Vazyme, Nanjing, China ) und 2 × Goldstar Master Mix (#CW0939 M, Cowin Bio., Peking, China). Es wurden zwei Mastermixe (AceQ und Goldstar) hergestellt, die jeweils 0,5 μl Primerset (10 μmol), 0,2 pmol Sonde und 10 μl des jeweiligen Mastermixes enthielten. Nach dem Vortexen wurden diese separat in PCR-Röhrchen aliquotiert und jedem Amplifikationssystem 2 μl P. gingivalis-positiver Probe zugesetzt. Ct-Werte und die relativen Fluoreszenzeinheiten (RFU) wurden verwendet, um die Leistung des Standard-Templates in jedem Amplifikationssystem zu vergleichen.
Für die Quantifizierung von P. gingivalis in der Probe bestanden je 20 μl Reaktionsgemisch für die direkte qPCR aus 2 μl Template/50 ng DNA, 0,5 μl Primerset (10 μmol), 0,2 pmol Sonde und 10 μl AceQ qPCR Probe Master-Mix. Die Reaktionsbedingungen waren 10 min bei 95 °C, 40 Zyklen von 10 s bei 95 °C und 60 s bei 60 °C. P. gingivalis ATCC 33277 mit 1 × 103 Kopien/ml und DEPC-Wasser (#R1600, Solarbio, Peking, China) wurden als Positiv- bzw. Negativkontrollen verwendet. Die Amplifikation wurde im CFX96 Real-Time PCR System (BIO-RAD) durchgeführt und die Ergebnisse wurden mit der CFX Maestro-Software analysiert.
Für die gesamte Datenanalyse wurde die Software SPSS Statistics 19.0 (IBM Corporation, Armonk, NY, USA) verwendet. Die Daten wurden als Prozentsatz (%), Mittelwert ± SEM (x̄ ± s) ausgedrückt. Vergleiche wurden unter Verwendung der χ2-Methode für kategoriale Daten und unabhängiger Stichproben-t-Tests für quantitative Daten durchgeführt. P < 0,05 wurde als statistisch signifikant angesehen. Die Übereinstimmung der Ergebnisse für TE-direkte qPCR und Lyse-direkte qPCR/Kit-qPCR von denselben Personen wurde anhand der prozentualen Übereinstimmung und des Cohen-κ-Koeffizienten bewertet. Die Sensitivität und Spezifität der beiden Assays wurden innerhalb von 95 % Konfidenzgrenzen verglichen.
AceQ qPCR Probe Master Mix |
|||
Q112-02 | Vazyme | 500 rxn (20 μl/rxn) | 120.55 EUR |
AceQ qPCR Probe Master Mix |
|||
Q112-03 | Vazyme | 2500 rxn (20 μl/rxn) | 543.5 EUR |
AceQ qPCR SYBR® Green Master Mix |
|||
Q111-02 | Vazyme | 500 rxn (20 μl/rxn) | 265.2 EUR |
AceQ qPCR SYBR® Green Master Mix |
|||
Q111-03 | Vazyme | 2500 rxn (20 μl/rxn) | 775.2 EUR |
AceQ Universal SYBR qPCR Master Mix |
|||
Q511-02 | Vazyme | 500 rxn (20 μl/rxn) | 152.72 EUR |
AceQ Universal SYBR qPCR Master Mix |
|||
Q511-03 | Vazyme | 2500 rxn (20 μl/rxn) | 688.5 EUR |
AceQ Universal SYBR qPCR Master Mix |
|||
Q511-00-100rxns | Vazyme | 100 rxns | 1.09 EUR |
AceQ Universal SYBR qPCR Master Mix |
|||
Q511-02-500rxns | Vazyme | 500 rxns | 158.14 EUR |
AceQ Universal SYBR qPCR Master Mix |
|||
Q511-03-2500rxns | Vazyme | 2,500 rxns | 712.94 EUR |
AceQ Probe Master Mix |
|||
Q113-EN02 | Vazyme | 500 rxns (20 μl/rxn) | 142.33 EUR |
AceQ Probe Master Mix |
|||
Q113-EN03 | Vazyme | 2,500 rxns (20 μl/rxn) | 634 EUR |
AceQ U+ Probe Master Mix |
|||
Q113-02 | Vazyme | 500 rxn (20 μl/rxn) | 320.4 EUR |
AceQ U+ Probe Master Mix |
|||
Q113-03 | Vazyme | 2500 rxn (20 μl/rxn) | 1010.4 EUR |
qPCR Master Mix |
|||
abx460014-1096tests | Abbexa | 10 × 96 tests | Ask for price |
qPCR Master Mix |
|||
abx460014-596tests | Abbexa | 5 × 96 tests | Ask for price |
qPCR Master Mix |
|||
abx460014-96tests | Abbexa | 96 tests | 337.5 EUR |
AceQ Universal Probe Master Mix V2 |
|||
Q513-EN02 | Vazyme | 500 rxns (20 μl/rxn) | 162.64 EUR |
AceQ Universal Probe Master Mix V2 |
|||
Q513-EN03 | Vazyme | 2,500 rxns (20 μl/rxn) | 724.5 EUR |
AceQ Universal Probe Master Mix V2 |
|||
Q513-EN02-500rxns | Vazyme | 500 rxns | 168.42 EUR |
AceQ Universal Probe Master Mix V2 |
|||
Q513-EN03-2500rxns | Vazyme | 2,500 rxns | 750.22 EUR |
AceQ U+ Universal Probe Master Mix V2 |
|||
Q513-02 | Vazyme | 500 rxn (20 μl/rxn) | 320.4 EUR |
AceQ U+ Universal Probe Master Mix V2 |
|||
Q513-03 | Vazyme | 2500 rxn (20 μl/rxn) | 1010.4 EUR |
SG qPCR Master Mix (2x) |
|||
E0401-01 | EURx | 100reactions | 51.23 EUR |
SG qPCR Master Mix (2x) |
|||
E0401-02 | EURx | 200reactions | 98.1 EUR |
SG qPCR Master Mix (2x) |
|||
E0401-03 | EURx | 1000reactions | 443.63 EUR |
MP qPCR Master Mix (2x) |
|||
E0424-01 | EURx | 100reactions | 55.59 EUR |
MP qPCR Master Mix (2x) |
|||
E0424-02 | EURx | 200reactions | 106.82 EUR |
MP qPCR Master Mix (2x) |
|||
E0424-03 | EURx | 1000reactions | 467.61 EUR |
RT Master Mix for qPCR |
|||
HY-K0510 | MedChemExpress | 1 mL (100 rxns) | 349.2 EUR |
Blank qPCR Master Mix (2x) |
|||
E0403-01 | EURx | 100reactions | 50.14 EUR |
Blank qPCR Master Mix (2x) |
|||
E0403-02 | EURx | 200reactions | 95.92 EUR |
Blank qPCR Master Mix (2x) |
|||
E0403-03 | EURx | 1000reactions | 431.64 EUR |
Probe qPCR Master Mix (2x) |
|||
E0420-01 | EURx | 100reactions | 55.59 EUR |
Probe qPCR Master Mix (2x) |
|||
E0420-02 | EURx | 200reactions | 106.82 EUR |
Probe qPCR Master Mix (2x) |
|||
E0420-03 | EURx | 1000reactions | 467.61 EUR |
ABsolute QPCR Master Mix (800x50µl) |
|||
AB-1132/B | Westburg | each | 1972.9 EUR |
ABsolute QPCR Master Mix (200x50µl) |
|||
AB-1133 | Westburg | each | 529.2 EUR |
Apex qPCR Probe Master Mix |
|||
42-116P | Genesee Scientific | 400 x 25µl Reactions/Unit | 341.44 EUR |
Apex qPCR GREEN Master Mix |
|||
42-116PG | Genesee Scientific | 400 x 25µl Reactions/Unit | 341.44 EUR |
Apex qPCR Probe Master Mix |
|||
42-117P | Genesee Scientific | 4000 x 25µl Reactions/Unit | 2926.74 EUR |
Apex qPCR GREEN Master Mix |
|||
42-117PG | Genesee Scientific | 4000 x 25µl Reactions/Unit | 2926.74 EUR |
Apex qPCR Probe Master Mix |
|||
42-118P | Genesee Scientific | 400 x 25µl Reactions/Unit | 341.44 EUR |
Apex qPCR GREEN Master Mix |
|||
42-118PG | Genesee Scientific | 400 x 25µl Reactions/Unit | 338.88 EUR |
Apex qPCR Probe Master Mix |
|||
42-119P | Genesee Scientific | 4000 x 25µl Reactions/Unit | 2926.74 EUR |
Apex qPCR GREEN Master Mix |
|||
42-119PG | Genesee Scientific | 4000 x 25µl Reactions/Unit | 2926.74 EUR |
Apex qPCR Probe Master Mix |
|||
42-120P | Genesee Scientific | 400 x 25µl Reactions/Unit | 341.44 EUR |
Apex qPCR GREEN Master Mix |
|||
42-120PG | Genesee Scientific | 400 x 25µl Reactions/Unit | 341.44 EUR |
Apex qPCR Probe Master Mix |
|||
42-121P | Genesee Scientific | 4000 x 25µl Reactions/Unit | 2926.74 EUR |
Apex qPCR GREEN Master Mix |
|||
42-121PG | Genesee Scientific | 4000 x 25µl Reactions/Unit | 3095.57 EUR |
SYBR Green qPCR Master Mix |
|||
HY-K0501 | MedChemExpress | 5 mL (500 rxns) | 315.6 EUR |
ChamQ SYBR qPCR Master Mix |
|||
Q311-02 | Vazyme | 500 rxns (20 μl/rxn) | 120.55 EUR |
ChamQ SYBR qPCR Master Mix |
|||
Q311-03 | Vazyme | 2,500 rxns (20 μl/rxn) | 543.5 EUR |
ChamQ SYBR qPCR Master Mix |
|||
Q311-00-100rxns | Vazyme | 100 rxns | 1.09 EUR |
ChamQ SYBR qPCR Master Mix |
|||
Q311-02-500rxns | Vazyme | 500 rxns | 124.83 EUR |
ChamQ SYBR qPCR Master Mix |
|||
Q311-03-2500rxns | Vazyme | 2,500 rxns | 562.79 EUR |
1ml PrecisionPLUS qPCR Master Mix |
|||
Z-PPLUS-1ML | Novacyt Group | 1ml | 81 EUR |
BioEasy Multiplex qPCR Master Mix |
|||
TRI-B58L1 | TRI Biotech | 200T/5mL | 403.2 EUR |
SG/ROX qPCR Master Mix (2x) |
|||
E0400-01 | EURx | 100reactions | 55.59 EUR |
SG/ROX qPCR Master Mix (2x) |
|||
E0400-02 | EURx | 200reactions | 106.82 EUR |
SG/ROX qPCR Master Mix (2x) |
|||
E0400-03 | EURx | 1000reactions | 467.61 EUR |
Fast SG qPCR Master Mix (2x) |
|||
E0411-01 | EURx | 100reactions | 57.77 EUR |
Fast SG qPCR Master Mix (2x) |
|||
E0411-02 | EURx | 200reactions | 107.91 EUR |
Fast SG qPCR Master Mix (2x) |
|||
E0411-03 | EURx | 1000reactions | 510.12 EUR |
SG onTaq qPCR Master Mix (2x) |
|||
E0405-01 | EURx | 100reactions | 50.14 EUR |
SG onTaq qPCR Master Mix (2x) |
|||
E0405-02 | EURx | 200reactions | 95.92 EUR |
SG onTaq qPCR Master Mix (2x) |
|||
E0405-03 | EURx | 1000reactions | 431.64 EUR |
ABsolute QPCR ROX Master Mix (800x50µl) |
|||
AB-1138/B | Westburg | each | Ask for price |
ABsolute QPCR ROX Master Mix (200x50µl) |
|||
AB-1139 | Westburg | each | 530.83 EUR |
2x SYBR Green qPCR Master Mix |
|||
B21202 | Bimake | 5 mL | 268.8 EUR |
2x SYBR Green qPCR Master Mix |
|||
B21203 | Bimake | 25 mL | 1027.2 EUR |
Fast Probe qPCR Master Mix (2x) |
|||
E0422-01 | EURx | 100reactions | 55.59 EUR |
Fast Probe qPCR Master Mix (2x) |
|||
E0422-02 | EURx | 200reactions | 106.82 EUR |
Fast Probe qPCR Master Mix (2x) |
|||
E0422-03 | EURx | 1000reactions | 467.61 EUR |
ViPrimePLUS Taq qPCR Master Mix, 150rxns |
|||
QLMM11 | Vivantis | each | Ask for price |
ViPrimePLUS AtTaq qPCR Master Mix, 150rxns |
|||
QLMM01 | Vivantis | each | Ask for price |
ChamQ SYBR Color qPCR Master Mix |
|||
Q411-02 | Vazyme | 500 rxns (20 μl/rxn) | 140.63 EUR |
ChamQ SYBR Color qPCR Master Mix |
|||
Q411-03 | Vazyme | 2,500 rxns (20 μl/rxn) | 634 EUR |
Entrans 2X qPCR Probe Master Mix |
|||
RK21208 | Abclonal | 40 RXN | 119 EUR |
ChamQ SYBR Color qPCR Master Mix |
|||
Q411-00-100rxns | Vazyme | 100 rxns | 1.09 EUR |
ChamQ SYBR Color qPCR Master Mix |
|||
Q411-02-500rxns | Vazyme | 500 rxns | 145.62 EUR |
ChamQ SYBR Color qPCR Master Mix |
|||
Q411-03-2500rxns | Vazyme | 2,500 rxns | 656.51 EUR |
1ml Precision FAST qPCR Master Mix |
|||
Z-PFAST-1ML | Novacyt Group | 1ml | 90 EUR |
2ml Precision FAST qPCR Master Mix |
|||
Z-PFAST-2ML | Novacyt Group | 2ml | 161 EUR |
MethyLight 2X qPCR Probe Master Mix |
|||
RK21240 | Abclonal | 1mL | 209.83 EUR |
BioLit FluroGreen qPCR Master Mix (2X) |
|||
60159 | Sisco Laboratories | 0.5 ml | 48.15 EUR |
BioLit FluroGreen qPCR Master Mix (2X) |
|||
60159-1 | Sisco Laboratories | 1 ml | 83.3 EUR |
miRNA Universal SYBR qPCR Master Mix |
|||
MQ101-01 | Vazyme | 125 rxn(20 μl/rxn) | 38.9 EUR |
miRNA Universal SYBR qPCR Master Mix |
|||
MQ101-02 | Vazyme | 500 rxn(20 μl/rxn) | 145 EUR |
ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix |
|||
Q711-02 | Vazyme | 500 rxn (20 μl/rxn) | 152.72 EUR |
ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix |
|||
Q711-03 | Vazyme | 2500 rxn (20 μl/rxn) | 688.5 EUR |
1ml PrecisionPLUS CL qPCR Master Mix |
|||
Z-PPLUS-CL-1ML | Novacyt Group | 1ml | 81 EUR |
1ml PrecisionPLUS LR qPCR Master Mix |
|||
Z-PPLUS-LR-1ML | Novacyt Group | 1ml | 81 EUR |
miRNA Universal SYBR qPCR Master Mix |
|||
MQ101-00-100rxns | Vazyme | 100 rxns | 1.09 EUR |
miRNA Universal SYBR qPCR Master Mix |
|||
MQ101-01-125rxns | Vazyme | 125 rxns | 40.28 EUR |
miRNA Universal SYBR qPCR Master Mix |
|||
MQ101-02-500rxns | Vazyme | 500 rxns | 150.15 EUR |
ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix |
|||
Q711-00-100rxns | Vazyme | 100 rxns | 1.09 EUR |
ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix |
|||
Q711-02-500rxns | Vazyme | 500 rxns | 158.14 EUR |
ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix |
|||
Q711-03-2500rxns | Vazyme | 2,500 rxns | 712.94 EUR |
ViPrimePLUS Lyophilized qPCR Master Mix, 150rxns |
|||
QLMM05 | Vivantis | each | Ask for price |
Fast SG/ROX qPCR Master Mix (2x) |
|||
E0413-01 | EURx | 100reactions | 61.04 EUR |
Fast SG/ROX qPCR Master Mix (2x) |
|||
E0413-02 | EURx | 200reactions | 116.63 EUR |
Fast SG/ROX qPCR Master Mix (2x) |
|||
E0413-03 | EURx | 1000reactions | 534.1 EUR |
SG/ROX onTaq qPCR Master Mix (2x) |
|||
E0407-01 | EURx | 100reactions | 54.5 EUR |
SG/ROX onTaq qPCR Master Mix (2x) |
|||
E0407-02 | EURx | 200reactions | 104.64 EUR |
SG/ROX onTaq qPCR Master Mix (2x) |
|||
E0407-03 | EURx | 1000reactions | 455.62 EUR |
BioEasy 5×qPCR Master Mix (Lyophilizable) |
|||
TRI-B76S1 | TRI Biotech | 200T | 388.08 EUR |
SYBR Green qPCR Master Mix (No ROX) |
|||
C0006-10mg | TargetMol Chemicals | 10mg | Ask for price |
SYBR Green qPCR Master Mix (No ROX) |
|||
C0006-1g | TargetMol Chemicals | 1g | Ask for price |
SYBR Green qPCR Master Mix (No ROX) |
|||
C0006-1mg | TargetMol Chemicals | 1mg | Ask for price |
SYBR Green qPCR Master Mix (No ROX) |
|||
C0006-50mg | TargetMol Chemicals | 50mg | Ask for price |
SYBR Green qPCR Master Mix (No ROX) |
|||
C0006-5mg | TargetMol Chemicals | 5mg | Ask for price |
SYBR Green qPCR Master Mix (No ROX) |
|||
HY-K0523 | MedChemExpress | 5 mL (500 rxns ) | 308.4 EUR |
SYBR Green qPCR Master Mix (Low ROX) |
|||
C0008-10mg | TargetMol Chemicals | 10mg | Ask for price |
SYBR Green qPCR Master Mix (Low ROX) |
|||
C0008-1g | TargetMol Chemicals | 1g | Ask for price |
SYBR Green qPCR Master Mix (Low ROX) |
|||
C0008-1mg | TargetMol Chemicals | 1mg | Ask for price |
SYBR Green qPCR Master Mix (Low ROX) |
|||
C0008-50mg | TargetMol Chemicals | 50mg | Ask for price |
SYBR Green qPCR Master Mix (Low ROX) |
|||
C0008-5mg | TargetMol Chemicals | 5mg | Ask for price |
SYBR Green qPCR Master Mix (Low ROX) |
|||
HY-K0522 | MedChemExpress | 5 mL (500 rxns ) | 308.4 EUR |
ABScript II RT Master Mix for qPCR |
|||
RK20402 | Abclonal | 10RXN | 87.2 EUR |
SYBR Green qPCR Master Mix (High ROX) |
|||
C0007-10mg | TargetMol Chemicals | 10mg | Ask for price |
SYBR Green qPCR Master Mix (High ROX) |
|||
C0007-1g | TargetMol Chemicals | 1g | Ask for price |
SYBR Green qPCR Master Mix (High ROX) |
|||
C0007-1mg | TargetMol Chemicals | 1mg | Ask for price |
SYBR Green qPCR Master Mix (High ROX) |
|||
C0007-50mg | TargetMol Chemicals | 50mg | Ask for price |
SYBR Green qPCR Master Mix (High ROX) |
|||
C0007-5mg | TargetMol Chemicals | 5mg | Ask for price |
Die direkte qPCR-Quantifizierung zeigte die höchste Zuverlässigkeit im Bereich von 1 × 106 bis 1 × 103 Kopien/ml in der Standardkonzentrationskurve mit einer Steigung von −3,321 (R2 = 0,997). Die Amplifikationseffizienz betrug 100 % und die Ct-Werte lagen innerhalb von 22–32 Zyklen . Somit lag die Nachweisgrenze für P. gingivalis bei 2 Kopien/Reaktion oder 1000 Kopien/ml. Ein Ct-Wert > 38 wurde als negativ definiert.